检验前、检验中、检验后,新冠核酸假阳性原因分析及预防
2021-10-03 10:34:02

 

 

 

迪飞医学·科普专栏系列

检验前、检验中、检验后,新冠核酸假阳性原因分析及预防

近日,一例高铁 阳性 乘客事件牵动大众心弦,社会紧急动员寻找涉疫人员,幸而该乘客新冠核酸和抗体复检阴性,初步判定是第三方实验室污染导致的假阳性。

 

笔者就此次事件,结合国家临检中心李金明主任、中山大学附属第一医院黄彬主任等众多专家授课内容及实验室工作经验,整理了核酸 假阳性 的原因及预防措施,从检验前、检验中、检验后三个方面与各位前辈同仁共同探讨,如何提高实验室检测质量,预防实验室污染。

 

 

一、检验前有哪些环节易产生假阳性呢?

 

首先是实验室的管理、制度及人员能力这类老生常谈的问题,实验人员严格遵循新型冠状病毒核酸检测的各项规章制度,是预防实验室污染的一个重要前提,必须做到实处,严格管理,所有操作人员按照规定进行工作。

 

其次是实验室的结构,实验室各区之间需相对独立的结构,各区物品不混用,仅通过传递窗传送物品,且单一方向流动。特别是样本处理区,需保证与其他区之间不存在除传递窗之外的连通,诸如墙壁之间的缝隙这些小地方也要经常检查,防止气溶胶污染,存在负压系统的实验室应每日观察压力表,保障各区之间的压差正常,异常时应检查是否实验室相对密封的环境是否损坏,或负压系统出现问题。

 

最后,临床取样环节也很重要,比如新冠疫苗导致的假阳性,在疫苗中的核酸片段被完全降解前,若人体表面或衣物残留的核酸片段污染样本,在高灵敏度的 PCR 扩增后很可能产生假阳性结果,所以应尽量避免为接种新冠疫苗 24 小时内的患者取样,同样 24 小时内有新冠疫苗接触的医务人员也应当避免参与取样、检测等工作。

 

 

二、检验中易产生假阳性的环节更多,较为常见的有以下 5

 

质控品污染

新冠弱阳性质控品及阳性对照本身为阳性物质,若操作或储存不当,极易污染,导致假阳性。实验室应当注意将弱阳性质控品与检测试剂分开储存,试剂盒打开后也应立即将阴阳对照转移至样本处理区妥善放置;阳性对照及弱阳性质控品开盖前先瞬离,避免开盖时溅出或污染手套;点样时应当先加完样本和阴性对照,盖好其他排的 PCR 管盖,最后再加阳性对照,阳性对照及弱阳性质控品加样可不在安全柜内进行;操作时手套一定要大小合适,宽松的手套更易污染,若出现可能的手套污染时,应及时将手套折返丢弃,更换新手套,勤换手套可以有效减少各类污染。

 

样本交叉污染

目前大部分实验室检测量都较大,在加样及提取过程中易产生交叉污染,特别是重点人群(如隔离人员)样本和一般健康筛查人群样本一同检测时,更易产生假阳性。对此,我们应把重点人群样本和一般健康筛查人群样本分区存放、分批检测,检测过程中应按《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册(试行第二版)》要求随机放置 3 个生理盐水参与提取以监测实验过程中的污染。

 

扩增产物污染

PCR 管盖没有盖紧或者受热变形,扩增产物会蒸发到 PCR 仪内部及实验室,造成大量且持续性的污染,特别是弱阳性质控品及阳性对照孔泄露后,更易污染实验室,产生大量假阳性。对此,我们应当选用配套且质检合格的 PCR 管及管盖,点样后确认所有 PCR 管都已盖好盖子、无松动,再上机扩增;扩增后的 PCR 管应小心取出,迅速放入密封袋作为一般医疗垃圾处理,严禁开盖,严禁高压灭菌处理。对于易产生假阳性的实验室应当进行实验室环境污染评估实验(生理盐水或焦碳酸二乙酯 (DEPC) 处理水开盖放置在提取仪或操作台面上过夜,然后进行提取扩增)进行评估,有实验室环境污染时应当暂停实验室日常检测,进行环境清洁、消杀、通风。

 

试剂污染

若试剂配制时被阳性质控品或阳性样本污染,则整板测试均为阳性,可通过更换试剂,重新扩增来判断是扩增产物污染还是试剂污染。作为预防,我们应当严格遵循实验室的单一流向操作、实验室工作服及物品不混用等实验室规章制度;同时,笔者前面提到的阳性质控品和阳性对照储存问题也应注意。

 

气溶胶及克隆质粒的污染

由于目前各实验室检测量均较大,在样本的各种混匀、加样、提取过程中不可避免的会产生气溶胶,若处理不当,可能会造成样本假阳性的污染。另外,若实验室的检测试剂使用克隆质粒作为阳性对照,很可能也会产生污染,因为克隆质粒在单位容积内含量相当高,在活细胞内的生长繁殖又较为便利。作为预防,每批次实验结束后都应及时进行 2 小时的紫外消杀,有条件的可同时使用尿嘧啶 -N- 糖基化酶( UNG )清理重点区域,对实验室中残留的核酸进行修饰、分解。

 

对于以上这些情况,实验室出现阳性,经严格复查流程判定为假阳性后,实验室的解决办法及分析思路,笔者参考了李金明主任《实时荧光 PCR 技术》一书中关于阴性质控品假阳性的处理思路,并稍作修改,详见下图:

 

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三、检验后的处理同样重要

 

当实验结束后,我们仍然不能放松警惕,除了正确发布报告外,为保障下一次实验的顺利进行,避免假阳性,实验室清洁及 2 小时的紫外消杀、定期使用核酸清除剂处理工作台面、加样枪、实验室终末消毒等工作也必不可少。

 

写在最后:因对此次假阳性事件的详细检测信息笔者并不清楚,无法做出判定,希望大家多多交流,共同努力,提出自己关于 假阳性 的建议及心得,预防新冠核酸假阳性,提高实验室工作质量,早日战胜新冠疫情。

 

 

 

来源:梅闯闯、谭俊青 / 检验医学